大腸桿菌是超聲波破碎儀相對(duì)容易破碎的樣品，通常大家都是破碎液離心后，取上清和沉淀分別用SDS-PAGE檢測，考染后，查看蛋白條帶，但很多人會(huì)發(fā)現(xiàn)沒有條帶？這種情況就要檢查破碎前的樣品是否正常、超聲是否滿足、電泳儀是否正常等等多個(gè)問題，這個(gè)單獨(dú)說一下采用必能信超聲波破碎儀這個(gè)步驟破碎大腸桿菌需要注意什么，希望能給您帶來幫助。

1、 樣品量體積、濃度是否合適？

體積過小的情況下（如1ml以下），需要考慮非接觸式超聲方式，接觸式超聲方式在如此小量情況下，探頭無法到達(dá)液面足夠距離，導(dǎo)致超聲能量無法足夠釋放，破碎效果受影響，而非接觸式方式就不用有此擔(dān)心。

菌液取得太少，PBS的量太大，導(dǎo)致濃度太低，也無法收集足夠的蛋白，一般搖瓶培養(yǎng)的菌，100ml菌液對(duì)應(yīng)的破菌液為10-20ml。

2、 樣品是否真正控溫？

由于超聲釋放能量的同時(shí)，還會(huì)釋放大量的熱，由此蛋白很容易變性，可選用冰浴法或冷卻循環(huán)水方式控溫，超聲波破碎儀也應(yīng)選擇電能輸入低，轉(zhuǎn)換效率高的品牌，轉(zhuǎn)換效率低的破碎儀，會(huì)產(chǎn)生額外大量熱能，可能會(huì)導(dǎo)致以上控溫方式失效。

3、 如何降低泡沫的產(chǎn)生？

產(chǎn)生泡沫的同時(shí)，超聲也就失去意義了，不僅無法正常釋放能量，還會(huì)過載停機(jī)，損傷探頭。想要降低泡沫產(chǎn)生，探頭需要盡量深入到樣品底部，如依然效果不佳，在不能調(diào)整樣品量的情況下，可選用非接觸式超聲方式，如可增加樣品量，問題就迎刃而解。

所以，選擇一款適合的超聲波破碎儀尤為重要，不僅要在較低電能輸入下，既能完成樣品破碎，又能有效減少額外熱量產(chǎn)生。

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